蝴蝶兰是一种热带气生兰，花似蝴蝶，故名。它的花形美丽，色彩丰富，花期长，被誉为& quot兰花皇后& quot在热带兰花中。是近年来最受欢迎的兰花之一。蝴蝶兰是单茎气生兰，植株很少长出侧芽，种子极难萌发。所以蝴蝶兰常规繁殖导致增殖缓慢。因此，常采用组织培养进行快速繁殖，以达到工厂化育苗的目的。

1.外植体

可用于蝴蝶兰快速繁殖的外植体包括茎尖、茎段、叶片、花梗腋芽、花梗节间、根尖等。方法不一样，难度不一样。

2.取样、消毒和原代培养

不同外植体的取样、消毒和初代培养方法不同。以下是对每种方法的介绍：3360

(1)花梗腋芽的培养

将蝴蝶兰的花梗剪开，用75%酒精棉球擦拭，切成5cm左右带芽的小段，小心翼翼地去掉苞叶，防止伤到芽，然后用2%次氯酸钠溶液消毒20分钟，不断摇晃。消毒后用无菌水冲洗3 ~ 5次，放入培养皿中。截掉0。用4号手术刀两端各5cm，将芽向上插在1/2ms 3mg/L 6苄基腺嘌呤培养基上。培养基中应添加20 g/L蔗糖、1 g/L水解乳蛋白、8 g/L琼脂和1 g/L活性炭，并调节pH值至5 .6。

(2)茎尖培养

茎尖是组织培养成功率较高的部位，但蝴蝶兰的茎尖深藏在叶片的缝隙中，很难分离和消毒。有两种方法可以获得茎尖。一种是用水洗净去叶的茎，然后用10%漂白粉溶液进行表面杀菌15分钟(每100毫升消毒液中加入1滴吐温20)。去除袁烨组后，用5%漂白粉溶液消毒10分钟，再用无菌水冲洗。

将茎尖和每片叶基部的腋芽，大小约2 ~ 3mm，接种在培养基上，液体培养用含15%椰奶的VW培养基，或加9 g/L琼脂固体培养。培养温度为25，光照强度为2 000 lux，每天光照时间为16 ~ 24。将液体以160 rpm的速度摇动，然后在7-10天后转移到新的培养基中。从开始培养，1个月后转入固体培养基。在此条件下，培养一个月后可形成类原球茎，然后进行继代培养。二是诱导花梗侧芽成为植株，然后用试管苗的茎尖进行培养。方法是：3360在双目显微镜下剥下大小约0.3mm的茎尖，接种于MS(附录表1 1) 3 mg/L 6苄基腺嘌呤固体培养基上，在温度(252)、光照强度1 500 le、每天光照10小时的条件下培养。14天后，茎尖膨大，呈浅绿色半球形。3个月后，长成一个组织块为6mm的桑葚状原球茎。这种方法最大的优点是省去了外植体消毒的程序，成功的可能性高。

(3)花梗节间的培养

正在拉伸的蝴蝶兰幼花茎具有分化原球茎的能力，因此快速拉伸的花茎节间可作为培养材料。从花梗可见的时间到接下来的45天，花梗等所有具有细胞分裂能力的幼花序和节间组织最有利于诱导原球茎形成，成功率为62。9% ~ 77.1%.从第一芽开始，随着花梗的发育和分化，原球茎的比例下降，可作为外植体的节间变短。具体操作方法是：切下花梗节间，表面消毒，然后切成1 ~ 1.5 mm厚的薄片，平铺在固体斜面培养基上。培养基配方为：倍VW无机盐，添加100 mg/L肌醇、0 .5 mg/L维生素B1、B6和烟酸、1 mg/L 6苄基腺嘌呤、2%蔗糖和0 .8%琼脂。培养温度为(262),光照强度为500 L，每天光照16小时。

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从3-4个月大的蝴蝶兰植株上取嫩叶，用自来水冲洗干净。在超净工作台上，用75%酒精消毒叶片30秒，然后用无菌水冲洗2 ~ 3次，用0 .1%氯化汞溶液浸泡11分钟，最后用无菌水冲洗4 ~ 5次。用无菌手术刀将叶子切成约5平方毫米的小块，平铺或接种于MS 3 .0 mg/L 6苄基腺嘌呤0 .2 mg/L NAA诱导培养基(培养基中加入20 g/L蔗糖、12 g/L琼脂和200 ml/L椰子汁)上，近轴面朝上。培养条件为3360，25 ~ 28，光照强度1 600 ~ 2 000，每天光照10 ~ 12。将幼叶切成片，在诱导培养基上培养1 ~ 2个月后，每片叶组织可产生1 ~ 7个原球茎。

(5)根组织培养

取培养中的花梗苗，切下根尖约1 ~ 1.5厘米长，用手术刀切去顶端约1毫米，露出根的分生组织。接种根尖诱导培养基MS 8 ~ 12 mg/L 6苄基腺嘌呤0。5 ~ 1.0 mg/L NAA 10%椰奶，添加3%蔗糖，并在培养基中添加泡沫海绵，pH5 .4~ 5 .6液体振荡培养(30 rpm)，培养温度(272),光照强度1 000 ~ 2 000 le，每天光照10小时。20天左右，材料膨胀，表面颜色明显变深。60天后，根分生组织开始有分化芽，分化率约为60%。大约45天后，切下分化的芽并转移到原球茎诱导培养基上2/3 ms

　　3 .继代培养

　　蝴蝶兰早期原球茎状球体外观象瘤状愈伤组织, 继续培养可见表面突起一个个圆球, 部分表面细胞分化出根毛状物。在原球茎球状体形成后, 无菌条件下将原球茎取出切割成几小块, 切块不可太小( 直径> 2 毫米) , 转入MS+2 .0 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤+ 0 .5 毫克/ 升萘乙酸( 加蔗糖20克/ 升, 琼脂12 克/ 升, 椰汁200 毫升/ 升)继代培养基中, 进行增殖培养。或在原球体的诱导时, 以1/ 2MS 为基本培养基, 激素以2 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤+ 0 .2 毫克/ 升萘乙酸, 配方中均加入糖20 克/ 升, 琼脂8 克/ 升, 调pH 值5 .6 , 也可获得理想的效果。培养60 天左右, 再进行分割转移。通过这种方式, 原球茎可成倍增长。

　　4 .小植株的培养

　　将不需继代的原球茎, 在无菌条件下, 切开丛生小植株, 将小植株转入育苗培养基上培养。育苗培养基可选用1/ 2MS+ 1 .5 毫克/ 升吲哚丁酸+ 0 .05 毫克/ 升萘乙酸, 并加入蔗糖20 克/ 升, 琼脂12 克/ 升, 活性炭5 克/ 升, 椰汁200毫升/ 升; 或2/ 3MS+ 香蕉100 克/ 升, 加蔗糖30/ 升,琼脂7 克/ 升。此后, 将其转入1/ 2MS+ 0 .8 毫克/ 升萘乙酸的生根培养基。不久, 小植株生根。当小植株长到一定大小时, 移入温室。切离丛生小植株时, 基部未分化的原球茎及刚分化的小芽应接入诱导培养基中, 作为种苗。一段时间后, 将长大的种苗移出, 种植, 小苗及原球茎可继续增殖与分化。

　　5 .试管苗出瓶移栽

　　当小植株长至4 厘米左右, 叶3～4 片,根2～3 条时, 即可移栽。此时将小植株带瓶移入温室内, 1～2 周后, 再将瓶塞半开或完全打开炼苗3～5 天后, 取出组培苗, 用自来水洗净其根部的培养基, 将根部放于50%多菌灵水溶液中消毒2小时, 药液浓度为1 000 倍, 晾干后即可栽植于水苔穴盘中。刚定植的植株, 温度白天以20～25 ℃为宜, 夜间以18～23 ℃为宜。以后, 温室内日温以25～29 ℃为宜, 夜温以20～24 ℃为宜。湿度以80%～90%为好, 以后逐渐保持在70% 左右。初期光照不宜太强, 一般以1 500～2 500 勒为佳。多采用遮阳网, 春秋用一层遮阳网遮光50%左右, 夏季用双层遮阳网, 遮光70%左右, 冬季可适当减少遮荫。缓苗后(两周左右) 逐步提高光照强度至6 000～8 000勒。蝴蝶兰根部忌积水, 水分过多, 易引起根系腐烂。刚出瓶的小苗应勤补水, 中苗或大苗根据干湿程度浇水; 一般情况下, 在盆内基质表面已变干, 盆面水草微发白时再浇水。春季可4～5天浇水1 次, 保持盆内基质潮湿即可。浇水时要让整个基质湿透。浇水时间以上午或清晨为佳。幼苗移栽初期不可施肥, 定植后1 个月,可喷施液肥。