核酸检测的检测方式是什么
admin
2023-11-12 14:03:36
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1.核酸序列依赖扩增法。NASBA是一种在体外等温扩增RNA的新技术，该技术通过一对引物介导，具有连续、均一的特定核苷酸序列。反应在42℃下进行，RNA模板在2小时内可扩增约109倍。NASBA的原理是提取病毒RNA，加入AMV逆转录酶、RNaseH、T7RNA聚合酶和引物进行扩增。整个反应分为非循环阶段和循环阶段:在非循环阶段，引物I与模板RNA退火，然后在AMV逆转录酶的作用下合成cDNA，形成RNA:DNA杂交体，然后RNA酶降解RNA，引物II与cDNA退火，在逆转录酶的作用下合成DNA的第二条互补链。双链DNA在T7RNA聚合酶的作用下可被其启动子序列转录，RNA在逆转录酶的作用下可被逆转录成DNA，进入循环相，大量扩增模板。
2.转录介导的扩增技术。TMA技术的原理与NASBA基本相同。略有不同的是，TMA使用MMLV逆转录酶和T7RNA聚合酶。MMLV逆转录酶具有逆转录酶活性和核糖核酸酶H活性。反应在41.5℃下进行，1小时内RNA模板可扩增约109倍。
3.连接酶催化的链式反应(LCR)是一种基于依赖于靶分子的寡核苷酸探针相互连接的探针扩增技术，是继PCR之后新发展起来的一种很有前途的体外扩增技术。其原理是两段寡核苷酸单链DNA探针与靶序列杂交。当两段DNA探针在没有突变的情况下从模板上褪色时，如果两个探针相邻且之间没有核苷酸缺口，则可以在连接酶的作用下连接起来，连接起来的新链可以作为模板指导下一轮连接产生新的亚链。如果核苷酸的碱基突变发生在连接区段，连接反应不能发生，扩增反应终止。
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